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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗ti，可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。

3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。

4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．

6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。

鉴别方法

（1）取该品0.1g溶于100mL水中，呈蓝色澄清溶液。

（2）该品微溶于乙醇，不溶于油脂，具有酸性染料的特性，能使动物纤维着色。

（3）100mL含有0.001g本品的0.02mol/L铵溶液的吸收波长为630±2nm。

（4）取该品水溶液，做纸上层析，其主色点的Rf值应与标准品相同。

纸上层析条件：

展开剂 ；无水乙醇；氨水（1%）=6：2：3

温 度 20~25℃

试液浓度 0.g/100mL

试液用量 2μL

展开剂前沿上升限度 160mm

亮蓝，又名食用蓝色1号（日本）、食用蓝色2号，属水溶性非偶氮类着色剂。

分子式C37H34N2Na2O9S3，相对分子质量792.86。亮蓝为食用蓝色色素,属于人工合成色素,是由邻磺酸与N--N- (3-磺基苄基)-经缩合、氧化而制得的。属于偶氮类化合物。可在食品、药品、化妆品等行业中作着色剂用。食品行业中适用于糕点、糖果、饮料等的着色。 【性状】 亮蓝为有金属光泽的深紫色至青铜色颗粒或粉末，无臭。易溶于水，水溶液呈亮蓝色；可溶于乙醇、丙二醇和甘油。耐光性、耐热性、耐酸性、耐盐性和耐微生物性很好，耐碱性和耐氧化还原特性较佳。弱酸时呈青色，强酸时呈黄色，在沸腾碱液中呈紫色 。 【性能】亮蓝的色度极强，通常都是与其他食用着色剂配合使用，使用量小，在0.0005%~0.01%之间。

保存期为5年《食用添加剂应用质量标准》（GB2760-1996）中要求：亮蓝可用于果味型饮料（液、固态）、水果汁型饮料、碳酸饮料、配制酒、糖块、点心上彩装、红绿丝、水果罐头、浓缩汁、青梅、对虾片，使用量为0.025g/kg；冰激凌，使用量为0.021999g/kg。红绿丝的使用量可翻倍；果味粉添加剂添加量按稀释液倍率的50%添加【使用说明】将规范称重的本产品放置器皿中，慢慢添加适量温开水，并持续拌和使之彻底融解，个人所得水溶液就可以用于上色。应用全过程中应留意尽量减少或降低酸、碱、y化剂、氧化剂、金属材料电离、微生物等化学物质的影响，并留意防止受高溫与曝晒，防止退色或变色。